Clonación y expresión recombinante de los dominios variables tipo-Inmunoglobulina de los inmunorreceptores PD-1 y PD-L1 humanos

Autores/as

Palabras clave:

Clonación, Proteína recombinante, PD-1, PD-L1, Inmunorreceptor

Resumen

En la inmunoterapia contra el cáncer el uso de anticuerpos monoclonales (MAb) que bloquean la interacción de los inmunorreceptores PD-1/PD-L1 mejora el tratamiento de los pacientes. Para producción de un MAb, la disponibilidad del antígeno proteico es un aspecto crítico. En este escenario la biotecnología biomédica permite la producción de cantidades virtualmente inagotables de las versiones recombinantes de esas proteínas. En este contexto, nuestro objetivo fue clonar y expresar los dominios variables tipo inmunoglobulinas (IgV) de PD-1 y PD-L1, debido a que la interacción entre ellas se produce entre sus dominios extracelulares IgV, se diseñaron iniciadores específicos para clonarlos. Una vez clonados, individualmente se ligaron a pcDNA6 y se introdujeron en Escherichia coli, y las transformantes positivas se definieron mediante PCR y secuenciación. Con las respectivas transformantes, se realizaron expresiones piloto inducidas con IPTG 1 mM, y la hora óptima de expresión se definió mediante electroforesis en geles de poliacrilamida al 12 %. Los resultados de la clonación fueron productos de 375 pb para PD-1 y 357 pb para PD-L1, cuyas secuencias mostraron un 99 % de identidad para PD-1 (GenBank OM363223) y un 100% para PD-L1 (GenBank OM363224). Ambas proteínas mostraron un tiempo óptimo de expresión de 4 h post-inducción y ~14 kDa consistentes con lo estimado. En conclusión, se logró la clonación y expresión recombinante de los dominios IgV de PD-1 y PD-L1, lo que permitirá la producción de un MAb u otra herramienta inmunoterapéutica contra el cáncer, algo que aún no se ha logrado en México

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Biografía del autor/a

  • González P., Laboratorio de Biomedicina Molecular, FCQB, UAS

    Priscilla González es una investigadora en formación, nacida en Moreno Valley, Riverside, California, Estados Unidos. Priscilla realizó sus estudios de Licenciatura en Biotecnología Genómica en la FCQB-UAS, graduada por Tesis en 2019, adscrita al Lab. Biomedicina Molecular (LBM), su trabajo derivó en un artículo indizado en JCR doi.org/10.1016/j.ram.2022.05.008. Posteriormente estudió la Maestría en Ciencias Biomédicas en nuestra facultad, donde se graduó con Mención Honorífica en 2021, desarrolló su Tesis también en el LBM, y de su trabajo experimental, derivó el presente manuscrito. Actualmente, fue aceptada al Doctorado en Ciencias Biomédicas de la División de Graduados de San Diego, en la Universidad de California, que inicia el próximo otoño.

  • Beltrán-López E., Laboratorio de Biomedicina Molecular, FCQB, UAS

    La MC. Evangelina Beltrán es QFB por la FCQB-UAS, Maestra en Ciencias Forenses por la Universidad Marista de Guadalajara, Jalisco; Es Profesora de la FCQB desde mayo del 2009, cuenta con 7 publicaciones, 6 de ellas indizadas en revistas JCR. Actualmente, Evangelina es estudiante del tercer semestre del Doctorado en Ciencias Biomédicas de la FCQB, adscrita al Laboratorio de Biomedicina Molecular.

  • López-Moreno H. M., Facultad de Ciencias Químico Biológicas-Universidad Autónoma de Sinaloa

    El Dr. López-Moreno es Licenciado Químico Farmacéutico Biólogo por la Facultad de Ciencias Químico-Biológicas (FCQB), de la Universidad Autónoma de Sinaloa y Doctor en Ciencias por el Doctorado Directo en Ciencias Biomédicas de la UNAM. Es Profesor Investigador Titular “C” adscrito a la FCQB-UAS desde el 2004. Miembro del Sistema Nacional de Investigadores (Nivel I); Nombre de Generación 2012-2017 de QFB; Evaluador del Consejo Mexicano para la Acreditación de la Educación Farmacéutica (COMAEF) AC, desde Octubre de 2010 a la fecha; Evaluador Internacional del Consejo Nacional de Evaluación y Acreditación Universitaria de Panamá (CONEAUPA), de desde el 2012 a la fecha; Evaluador de PRODEP, SEP; Evaluador de Proyectos CONAHCYT; Evaluador de Proyectos PROFAPI, UAS; Responsable Técnico de 17 proyectos de investigación (9 con financiamiento externo a la UAS); Revisor par del journal “Vector Borne and Zoonotic Diseases”, del journal “Frontiers in Immunology” y de la revista Biomédica de Colombia; Líder del CAC Biotecnología Biomédica UAS-264; cultiva dos Líneas de investigación: 1. Biotecnología Biomédica y 2. Apoptosis de Giardia lamblia; Consejero Universitario de la UAS, de 2009-2010; Jefe de Carrera en QFB en 2008 y 2011; Miembro Honorario del Sistema Sinaloense de Investigadores y Tecnólogos; Perfil PRODEP, SEP. Ha dirigido un total de 55 Tesis (4 Doctorado, 17 Maestría y 34 Licenciatura). Ha publicado 38 Artículos Científicos indizados en JCR; 18 Memorias in Extenso; 13 Publicaciones de Divulgación; 60 Presentaciones en Congresos Nacionales e Internacionales; cuenta con 330 citas científicas.

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Publicado

07/09/2024

Número

Sección

Artículos Cientificos

Categorías

Cómo citar

González, P., Beltrán López, E., & López Moreno, H. S. . (2024). Clonación y expresión recombinante de los dominios variables tipo-Inmunoglobulina de los inmunorreceptores PD-1 y PD-L1 humanos. QUIBIOUAS Revista De Ciencias Químico Biológicas, 2, 1-10. https://revistas.uas.edu.mx/index.php/QBU/article/view/598

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