Clonación y expresión recombinante de los dominios variables tipo-Inmunoglobulina de los inmunorreceptores PD-1 y PD-L1 humanos

Resumen

En la inmunoterapia contra el cáncer el uso de anticuerpos monoclonales (MAb) que bloquean la interacción de los inmunorreceptores PD-1/PD-L1 mejora el tratamiento de los pacientes. Para producción de un MAb, la disponibilidad del antígeno proteico es un aspecto crítico. En este escenario la biotecnología biomédica permite la producción de cantidades virtualmente inagotables de las versiones recombinantes de esas proteínas. En este contexto, nuestro objetivo fue clonar y expresar los dominios variables tipo inmunoglobulinas (IgV) de PD-1 y PD-L1, debido a que la interacción entre ellas se produce entre sus dominios extracelulares IgV, se diseñaron iniciadores específicos para clonarlos. Una vez clonados, individualmente se ligaron a pcDNA6 y se introdujeron en Escherichia coli, y las transformantes positivas se definieron mediante PCR y secuenciación. Con las respectivas transformantes, se realizaron expresiones piloto inducidas con IPTG 1 mM, y la hora óptima de expresión se definió mediante electroforesis en geles de poliacrilamida al 12 %. Los resultados de la clonación fueron productos de 375 pb para PD-1 y 357 pb para PD-L1, cuyas secuencias mostraron un 99 % de identidad para PD-1 (GenBank OM363223) y un 100% para PD-L1 (GenBank OM363224). Ambas proteínas mostraron un tiempo óptimo de expresión de 4 h post-inducción y ~14 kDa consistentes con lo estimado. En conclusión, se logró la clonación y expresión recombinante de los dominios IgV de PD-1 y PD-L1, lo que permitirá la producción de un MAb u otra herramienta inmunoterapéutica contra el cáncer, algo que aún no se ha logrado en México